陀枪师姐第5部兩個不同單親家庭長大的女孩，從小就讀一樣的學校，長大後也進入同一個職場成為同事，兩人外表與個性天差地別，相鬥十幾年不厭倦。某一天，一個黑道老大突然出現在她們的生活中，聲稱是她們的父親，而兩人居然是同父異母的姐妹……